Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 14112:2024 về Phân bón - Định lượng Bacillus pumilus bằng kỹ thuật đếm khuẩn lạc và real-time PCR
TIÊU CHUẨN QUỐC GIA
TCVN 14112:2024
PHÂN BÓN - ĐỊNH LƯỢNG BACILLUS PUMILUS BẰNG KỸ THUẬT ĐẾM KHUẨN LẠC VÀ REAL-TIME PCR
Fertilizer- Enumeration of Bacillus pumilus - The plate count and real-time PCR method
Lời nói đầu
TCVN 14112:2024 do Trường Đại học Khoa học Tự nhiên biên soạn, Bộ Nông nghiệp và Phát triển Nông thôn đề nghị, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng thẩm định, Bộ Khoa học và Công nghệ công bố.
PHÂN BÓN - ĐỊNH LƯỢNG BACILLUS PUMILUS BẰNG KỸ THUẬT ĐẾM KHUẨN LẠC VÀ REAL-TIME PCR
Fertilizer- Enumeration of Bacillus pumilus - The plate count and real-time PCR method
1 Phạm vi áp dụng
Tiêu chuẩn này quy định phương pháp định lượng B. pumilus trong phân bón hoặc nguyên liệu sản xuất phân bón bằng kỹ thuật đếm khuẩn lạc và real-time PCR.
Tiêu chuẩn này sử dụng quy trình real-time PCR cho phép thử khẳng định B. Pumilus.
2 Tài liệu viện dẫn
Các tài liệu viện dẫn sau là rất cần thiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn này. Đối với các tài liệu viện dẫn ghi năm công bố thì áp dụng phiên bản được nêu. Đối với các tài liệu viện dẫn không ghi năm công bố thì áp dụng phiên bản mới nhất, bao gồm cả các sửa đổi, bổ sung (nếu có).
TCVN 6166, Phân bón vi sinh vật cố định nitơ.
TCVN 6404 (ISO 7218), Vi sinh vật trong thực phẩm và thức ăn chăn nuôi. Yêu cầu chung và hướng dẫn kiểm tra vi sinh vật.
TCVN 7682 (ISO 20838), Vi sinh vật trong thực phẩm và thức ăn chăn nuôi. Phản ứng chuỗi Polymeraza (PCR) để phát hiện sinh vật gây bệnh từ thực phẩm. Yêu cầu về khuếch đại và phát hiện đối với các phương pháp định tính.
TCVN 7715-2 (ISO 10272-2), Vi sinh vật trong thực phẩm và thức ăn chăn nuôi. Phương pháp phát hiện và định lượng Campylobacter spp. Phần 2: Kỹ thuật đếm khuẩn lạc.
TCVN 8128 (ISO 11133), Vi sinh vật trong thực phẩm, thức ăn chăn nuôi và nước. Chuẩn bị, sản xuất, bảo quản và thử hiệu năng của môi trường nuôi cấy.
TCVN 11133 (ISO 22119), Vi sinh vật trong thực phẩm và thức ăn chăn nuôi - Phản ứng chuỗi polymerase real-time (PCR real-time) để phát hiện vi sinh vật gây bệnh từ thực phẩm - Định nghĩa và yêu cầu chung.
TCVN 11134 (ISO 22174), Vi sinh vật trong thực phẩm và thức ăn chăn nuôi. Phản ứng chuỗi polymerase (PCR) để phát hiện vi sinh vật gây bệnh từ thực phẩm. Định nghĩa và yêu cầu chung.
TCVN 11925 (ISO 20837), Vi sinh vật trong thực phẩm và thức ăn chăn nuôi. Phản ứng chuỗi Polymerase (PCR) để phát hiện vi sinh vật gây bệnh từ thực phẩm. Yêu cầu về chuẩn bị mẫu để phát hiện định tính.
TCVN 12105, Phân bón vi sinh vật. Lấy mẫu.
3 Thuật ngữ, định nghĩa
Trong tiêu chuẩn này áp dụng các thuật ngữ, định nghĩa sau đây:
3.1
Môi trường nuôi cấy sinh màu Bacillus (Bacillus chromogenic medium - BM)
Môi trường nuôi cấy vi khuẩn thuộc nhóm Bacillus, giúp nhận dạng nhanh các loài Bacillus dựa trên màu sắc và hình dạng khuẩn lạc (colony-forming unit - CFU).
3.2
Khuẩn lạc B. pumilus giả định (Putative Bacillus pumilus CFU - PBC)
Là khuẩn lạc mang các đặc điểm phù hợp với các mô tả về khuẩn lạc của B. pumilus trên môi trường BM, khi tiến hành thử nghiệm theo tiêu chuẩn này và chưa qua phép thử khẳng định.
3.3
Phép thử khẳng định B. pumilus (Bacillus pumilus confirmation)
Là phương pháp kiểm tra định tính các khuẩn lạc B. pumilus giả
| Số hiệu | TCVN14112:2024 |
|---|---|
| Loại văn bản | Tiêu chuẩn Việt Nam |
| Lĩnh vực | Môi trường – Công nghệ |
| Ngày ban hành | 01/01/2024 |
| Ngày hiệu lực | 11/07/2026 |
| Nơi ban hành | *** |
| Người ký | *** |
| Tình trạng | Chưa xác định |
Tóm tắt mang tính tham khảo.
Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 14112:2024 về Phân bón - Định lượng Bacillus pumilus bằng kỹ thuật đếm khuẩn lạc và real-time PCR là văn bản kỹ thuật chuyên ngành quy định phương pháp xác định mật độ vi khuẩn Bacillus pumilus trong các sản phẩm phân bón. Mặc dù các thông tin về ngày ban hành, cơ quan ban hành và ngày áp dụng cụ thể chưa được cập nhật chi tiết trong tài liệu trích xuất, tiêu chuẩn này đóng vai trò là căn cứ kỹ thuật thống nhất cho hoạt động kiểm nghiệm và quản lý chất lượng phân bón vi sinh tại Việt Nam. - Phạm vi điều chỉnh và đối tượng áp dụng Phạm vi điều chỉnh: Tiêu chuẩn này quy định quy trình kỹ thuật nhằm định lượng vi khuẩn Bacillus pumilus có trong các loại phân bón (bao gồm phân bón vi sinh vật, phân bón hữu cơ vi sinh và các loại phân bón khác có bổ sung chủng vi sinh vật này) bằng cách kết hợp hai phương pháp: đếm khuẩn lạc và kỹ thuật real-time PCR. Đối tượng áp dụng: Tiêu chuẩn áp dụng đối với các phòng thử nghiệm, tổ chức chứng nhận hợp quy, cơ quan quản lý nhà nước về phân bón, cùng các tổ chức, cá nhân hoạt động trong lĩnh vực sản xuất, nhập khẩu, kinh doanh và kiểm nghiệm chất lượng phân bón tại Việt Nam. - Phương pháp định lượng bằng kỹ thuật đếm khuẩn lạc (Colony Counting) Đây là phương pháp nuôi cấy vi sinh vật truyền thống nhằm xác định số lượng tế bào vi khuẩn sống có khả năng hình thành khuẩn lạc (biểu thị bằng đơn vị CFU) trên một đơn vị khối lượng (gam) hoặc thể tích (mililit) mẫu phân bón. Quy trình thực hiện bao gồm các bước chuẩn bị mẫu thử, tiến hành pha loãng mẫu theo các dãy thập phân thích hợp, cấy mẫu lên môi trường thạch dinh dưỡng chuyên dụng, ủ ở điều kiện nhiệt độ và thời gian quy định, sau đó tiến hành đếm và tính toán số lượng khuẩn lạc đặc trưng của Bacillus pumilus xuất hiện trên đĩa thạch. - Phương pháp định lượng bằng kỹ thuật real-time PCR Kỹ thuật real-time PCR (Phản ứng chuỗi polymerase thời gian thực) được áp dụng để phát hiện và định lượng chính xác trình tự DNA đặc hiệu của vi khuẩn Bacillus pumilus. Phương pháp này sử dụng các cặp mồi (primers) và mẫu dò (probe) huỳnh quang đặc hiệu để khuếch đại vùng gen mục tiêu, giúp rút ngắn thời gian phân tích, tăng độ nhạy, độ đặc hiệu và hạn chế tối đa sai sót so với phương pháp nuôi cấy thông thường, đặc biệt trong việc phân biệt Bacillus pumilus với các loài Bacillus khác có đặc điểm hình thái tương tự. - Ý nghĩa của việc kết hợp hai kỹ thuật trong tiêu chuẩn Sự kết hợp giữa phương pháp đếm khuẩn lạc và real-time PCR giúp tối ưu hóa độ chính xác của kết quả kiểm nghiệm. Phương pháp đếm khuẩn lạc giúp xác định mật độ vi sinh vật sống thực tế hoạt động trong phân bón, trong khi kỹ thuật real-time PCR đóng vai trò khẳng định chính xác sự hiện diện của loài Bacillus pumilus ở cấp độ sinh học phân tử. Việc chuẩn hóa quy trình này giúp các cơ quan chức năng và doanh nghiệp có một thước đo kỹ thuật đồng bộ, khách quan để đánh giá chất lượng phân bón vi sinh lưu thông trên thị trường. Hiện tại, thông tin về ngày có hiệu lực và tình trạng hiệu lực của Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 14112:2024 vẫn đang được cập nhật theo các công bố chính thức từ cơ quan nhà nước có thẩm quyền.
- Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 13762:2023 về Phân bón - Xác định hàm lượng paclobutrazol bằng phương pháp sắc ký khí (GC)
- Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 13763:2023 về Phân bón - Xác định hàm lượng nhóm nitrophenolate bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC)
- Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 13764:2023 về Phân bón - Xác định hàm lượng nhóm hoạt chất cytokinin bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC)
- Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 14108:2024 về Phân bón - Xác định hàm lượng các nguyên tố đất hiếm - Phương pháp khối phổ plasma cặp cảm ứng (ICP-MS)
- Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 14109:2024 về Phân bón - Xác định hàm lượng polyphenol tổng số - Phương pháp quang phổ hấp thụ phân tử dùng thuốc thử Folin-Ciocalteu
- Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 6166:2002 về Phân bón vi sinh vật cố định nitơ
- Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 7715-2:2007 (ISO 10272-2 : 2006) về Vi sinh vật trong thực phẩm và thức ăn chăn nuôi - Phương pháp phát hiện và định lượng Campylobacter spp - Phần 2: Kỹ thuật đếm khuẩn lạc
- Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 7682:2007 (ISO 20838 : 2006) về Vi sinh vật trong thực phẩm và thức ăn chăn nuôi - Phản ứng chuỗi polymeraza (PCR) để phát hiện sinh vật gây bệnh từ thực phẩm - Yêu cầu về khuếch đại và phát hiện đối với các phương pháp định tính
- Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 8128:2015 (ISO 11133:2014) về Vi sinh vật trong thực phẩm, thức ăn chăn nuôi và nước - Chuẩn bị, sản xuất, bảo quản và thử hiệu năng của môi trường nuôi cấy
- Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 11133:2015 (ISO 22119:2011) về Vi sinh vật trong thực phẩm, thức ăn chăn nuôi - Phản ứng chuỗi polymerase real-time (pcr real-time) để phát hiện vi sinh vật gây bệnh từ thực phẩm - Định nghĩa và yêu cầu chung Vi sinh vật trong thực phẩm, thức ăn chăn nuôi. Phản ứng chuỗi polymerase real-time (pcr real-time) để phát hiện vi sinh vật gây bệnh từ thực phẩm. Định nghĩa và yêu cầu chung
- Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 11134:2015 (ISO 22174:2005) về Vi sinh vật trong thực phẩm và thức ăn chăn nuôi - Phản ứng chuỗi polymerase (PCR) để phát hiện vi sinh vật gây bệnh từ thực phẩm - Định nghĩa và yêu cầu chung
- Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 6404:2016 (ISO 7218:2007 with amendment 1:2013) về Vi sinh vật trong thực phẩm và thức ăn chăn nuôi - Yêu cầu chung và hướng dẫn kiểm tra vi sinh vật
- Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 11925:2017 (ISO 20837:2006) về Vi sinh vật trong thực phẩm và thức ăn chăn nuôi - Phản ứng chuỗi polymerase (PCR) để phát hiện vi sinh vật gây bệnh từ thực phẩm - Yêu cầu về chuẩn bị mẫu để phát hiện định tính
- Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 12105:2018 về Phân bón vi sinh vật - Lấy mẫu