Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 13917-5:2024 về Phát hiện và định lượng thực vật biến đổi gen và sản phẩm có nguồn gốc từ thực vật biến đổi gen bằng phương pháp real-time PCR - Phần 5: Sự kiện ngô chuyển gen MON 87460

Tóm tắt mang tính tham khảo.

Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 13917-5:2024 về Phát hiện và định lượng thực vật biến đổi gen và sản phẩm có nguồn gốc từ thực vật biến đổi gen bằng phương pháp real-time PCR - Phần 5: Sự kiện ngô chuyển gen MON 87460 quy định quy trình kỹ thuật chi tiết nhằm phát hiện và định lượng sự hiện diện của sự kiện ngô biến đổi gen MON 87460 trong thực phẩm, thức ăn chăn nuôi và các mẫu sản phẩm nông nghiệp. Phạm vi và đối tượng áp dụng Phạm vi áp dụng: Tiêu chuẩn này hướng dẫn phương pháp real-time PCR cụ thể để xác định định tính và định lượng DNA của sự kiện ngô chuyển gen MON 87460. Phương pháp này áp dụng cho các phòng thử nghiệm thực hiện phân tích sản phẩm biến đổi gen (GMO). Đối tượng áp dụng: Các cơ quan quản lý nhà nước về an toàn thực phẩm, các tổ chức chứng nhận, phòng thử nghiệm kiểm nghiệm chất lượng sản phẩm nông nghiệp, và các doanh nghiệp sản xuất, kinh doanh thực phẩm, thức ăn chăn nuôi liên quan đến ngô và sản phẩm từ ngô. Nguyên lý của phương pháp Phương pháp dựa trên việc khuếch đại trình tự DNA đặc hiệu của sự kiện ngô chuyển gen MON 87460 bằng kỹ thuật real-time PCR. Quá trình khuếch đại được phát hiện và đo lường thông qua tín hiệu huỳnh quang phát ra từ đầu dò (probe) đặc hiệu liên kết với đoạn DNA mục tiêu trong suốt các chu kỳ nhiệt. Để định lượng, tỷ lệ phần trăm DNA của ngô MON 87460 được xác định bằng cách so sánh lượng DNA mục tiêu với lượng DNA của gen nội chuẩn ngô (ví dụ gen taxon-specific) trên cùng một mẫu thử. Thiết bị, dụng cụ và thuốc thử yêu cầu Thiết bị: Hệ thống máy real-time PCR có khả năng đọc các kênh màu huỳnh quang tương thích với đầu dò sử dụng; máy ly tâm tốc độ cao; máy lắc; tủ ấm; và các thiết bị phụ trợ trong phòng thí nghiệm sinh học phân tử. Thuốc thử và hóa chất: Hỗn hợp phản ứng PCR (MasterMix), các cặp mồi (primers) và đầu dò (probes) đặc hiệu cho sự kiện MON 87460 và gen tham chiếu của ngô; nước không chứa nuclease; mẫu chuẩn tham chiếu (CRM) hoặc plasmid chuẩn chứa trình tự đích. Quy trình thực hiện thử nghiệm Tách chiết DNA: Tiến hành tách chiết DNA từ mẫu thử bằng phương pháp phù hợp (như phương pháp CTAB hoặc sử dụng kit thương mại đã được thẩm định) nhằm thu được DNA có độ tinh sạch cao, không chứa chất ức chế phản ứng PCR. Chuẩn bị phản ứng PCR: Thiết lập các hỗn hợp phản ứng cho mẫu thử, mẫu kiểm chứng dương, mẫu kiểm chứng âm và mẫu kiểm chứng không có DNA (NTC) theo đúng tỷ lệ thể tích quy định. Chạy chương trình nhiệt: Cài đặt chu trình nhiệt trên máy real-time PCR bao gồm các giai đoạn: hoạt hóa enzyme polymerase, biến tính DNA, bắt cặp và kéo dài chuỗi tương ứng với đặc tính của cặp mồi và đầu dò sử dụng. Đọc, phân tích và biểu thị kết quả Đánh giá tính hợp lệ: Phép thử chỉ được công nhận là hợp lệ khi mẫu kiểm chứng dương cho tín hiệu huỳnh quang rõ rệt (giá trị Ct nằm trong khoảng cho phép), mẫu kiểm chứng âm và mẫu NTC không xuất hiện tín hiệu khuếch đại vượt ngưỡng. Xác định kết quả định tính: Mẫu thử được coi là dương tính với sự kiện ngô MON 87460 nếu đường cong khuếch đại có dạng hình chữ S đặc trưng và giá trị Ct nhỏ hơn giá trị ngưỡng thiết lập. Xác định kết quả định lượng: Sử dụng đường chuẩn (standard curve) được xây dựng từ các điểm nồng độ của mẫu chuẩn để tính toán hàm lượng phần trăm DNA của ngô MON 87460 so với tổng số DNA ngô trong mẫu. Hiệu lực thi hành Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 13917-5:2024 có hiệu lực thi hành kể từ ngày được công bố bởi cơ quan nhà nước có thẩm quyền về khoa học và công nghệ, đóng vai trò làm căn cứ kỹ thuật thống nhất cho hoạt động kiểm nghiệm và quản lý an toàn sinh học đối với các sản phẩm ngô chuyển gen tại Việt Nam.